HE染色とは？【HE染色の原理と流れについて】

HE染色とは？HE染色の原理と流れについて

HE染色とは

HE染色（Hematoxylin and Eosin staining）は、病理学や組織学において最も一般的に使用される染色法です。

この染色法は、組織切片を観察しやすくするために行われ、特に細胞や組織の構造を明確に可視化することができます。

HE染色は、ヘマトキシリン（Hematoxylin）とエオジン（Eosin）の2つの染料を使用します。

HE染色像⇩

出典：厚生労働省ホームページ　第59回臨床検査技師国家試験の問題および正答について　午後問題別冊（https://www.mhlw.go.jp/seisakunitsuite/bunya/kenkou_iryou/iryou/topics/dl/tp130422-05d.pdf）

HE染色の原理

1. ヘマトキシリン染色
   • ヘマトキシリンは塩基性色素であり、核酸や核タンパク質などの酸性構造（例：DNAやRNA）に親和性があります。
   • ヘマトキシリン自体は無色ですが、金属塩と結合すると青紫色を発色します。
   • 結果として、細胞核やリボソームなどの酸性成分が青紫色に染まります。
2. エオジン染色
   • エオジンは酸性色素であり、細胞質や細胞外マトリックスなどの塩基性構造に親和性があります。
   • エオジンはピンクから赤色を呈し、細胞質や結合組織を染色します。

パラフィン包埋とは？

パラフィン包埋（Paraffin Embedding）とは、組織標本をパラフィン（固体のワックス状物質）に浸透させて固めるプロセスのことです。この方法は以下のような目的で行われます：

• 組織の保存：長期間保存しても形態を保つ。
• 顕微鏡観察用の薄切標本作成：組織を非常に薄い切片（3～10 µm程度）にするために硬さを与える。
• 染色の準備：H&E染色や免疫染色などの処理に適応。

パラフィン包埋の流れ

それでは、パラフィン包埋の流れを確認していきましょう。

ステップ１：固定

組織の形態を維持するため、「ホルマリン溶液（10％中性緩衝ホルマリン）など」で固定します。

AZARASHI

固定することで、細胞構造や組織の崩壊を防ぐよ。

ステップ２：脱水

組織内の水分を除去（脱水）し、パラフィンと置き換えやすくします。

• 使用する液体：エタノール（70％→80％→95％→100％など濃度を徐々に上げます）。

AZARASHI

脱水・透明化の過程で組織が縮む可能性ああるので、段階的な脱水を心がけよう！

ステップ３：脱アルコール

キシレンを用いてエタノールを除去（脱アルコール）し（通常3回）、パラフィンが浸透しやすい状態にします。

• 使用する液体：キシレン

AZARASHI

キシレンは揮発性で毒性が高いので、換気を徹底しよう。

ステップ４：パラフィン浸透

脱水・脱アルコール処理を行った組織を「液体状のパラフィン（60℃程度）」に浸して組織内に浸透させます（＝パラフィン浸透）。

• プロセス：通常2～3回、数時間かけて行います。

AZARASHI

パラフィンが完全に浸透しないと、切片作成時に組織が壊れるよ。

ステップ５：パラフィン包埋

組織を液体パラフィンで固めます（=パラフィン包埋）。

AZARASHI

組織の向き（観察したい断面）を意識して配置しよう。

ステップ６：冷却

冷却し、パラフィンを固めます。これで「パラフィンブロック」が完成します。

AZARASHI

パラフィン包埋は、組織の長期保存や顕微鏡観察において欠かせない技術です。基本的な流れを理解し、注意点を守ることで、高品質な標本を作成できます。

ミクロトームでの切片作成（薄切）

準備したパラフィンブロックから、ミクロトームを使って薄切標本を作成できます。

HE染色の流れ

次に、HE染色の流れを確認していきましょう。

ステップ１：脱パラフィン

パラフィン包埋された組織切片を脱パラフィン処理します。通常、キシレンを用いて行われます。

• 使用する液体：キシレン（通常、3回）。

ステップ２：浸水

脱パラフィン後、切片をアルコール濃度を徐々に下げることで水性状態に戻します（＝浸水）。

• 使用する液体：エタノール（100％→100％→100％→95％→80％など濃度を徐々に下げます）。

ステップ３： ヘマトキシリン染色

切片をヘマトキシリン溶液に浸し、細胞核を青紫色に染色します。

その後、Washを行い、過剰な染料を除去します。

ステップ４：エオジン染色

切片をエオジン溶液に浸し、細胞質や結合組織をピンク色に染色します。

ステップ５：脱水

再びアルコールを用いて切片を脱水します。

• 使用する液体：エタノール（80％→95％→100％→100％→100％など濃度を徐々に上げます）。

ステップ６：透徹

キシレンを用いて切片を透徹します。

• 使用する液体：キシレン（通常、3回）。

ステップ７：封入

封入剤を用いてカバーガラスを取り付け、観察可能な状態にします。

染色結果の観察

• 細胞核：青紫色
• 細胞質：ピンク色
• 結合組織：薄いピンクから赤色

HE染色は、組織や細胞構造の基本的な観察を可能にする重要な技術であり、病理診断や研究において欠かせない手法です。

HE染色とは？【HE染色の原理と流れ】についてについてはこれで以上です。

次は「1)クロマチン免疫沈降（ChIP）の原理と概要」について学んでいきましょう。